小鼠組織特異性基因沉默或誘導(dǎo)新途徑

短發(fā)夾RNA-Short hairpin RNAs (shrnas)是設(shè)計(jì)為能夠形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的非編碼小RNA分子，短發(fā)夾RNA能夠通過RNA干擾來抑制基因的表達(dá)。Thomas Rosenquist’s group和Greg Hannon’s group聯(lián)合研究了在哺乳動(dòng)物種系細(xì)胞中shRNAs的轉(zhuǎn)移導(dǎo)致基因長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定沉默的機(jī)制。

Rosenquist and colleagues一開始希望用標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)基因方法，用線性化片段注射入細(xì)胞核中產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因建成系而獲得在種系細(xì)胞中能夠轉(zhuǎn)移基因沉默的小鼠品系，但是嘗試不成功。他們接著選擇了堿基切除修復(fù)有關(guān)的DNA N-糖基化酶-Neil1作為目標(biāo)基因，用建立胚胎干細(xì)胞的方法來進(jìn)行。

研究者首先構(gòu)建了一個(gè)針對(duì)抑制Neil1基因的shRNA表達(dá)載體，將此載體用電穿孔的方法注射入小鼠胚胎干細(xì)胞。穩(wěn)定的胚胎干細(xì)胞系表現(xiàn)出Neil1蛋白80%的表達(dá)降低，這些細(xì)胞對(duì)離子輻射的敏感度上升了兩倍，這與Neil1的功能喪失是一致的。

研究者將兩個(gè)獨(dú)立的胚胎干細(xì)胞系注射到小鼠囊泡中，構(gòu)建成為嵌合型小鼠。嵌合小鼠的幾個(gè)F1子代中檢測(cè)到了種系細(xì)胞傳遞的基因沉默。F1小鼠的幾種組織中Neil1蛋白水平和mRNA水平都發(fā)生了降低。

研究者認(rèn)為shRNA能夠被用來建立特定基因沉默的種系轉(zhuǎn)基因小鼠品系。這個(gè)研究為在小鼠中進(jìn)行組織特異性基因沉默或誘導(dǎo)開辟了新的道路。